BRAF 基因是位于人類(lèi) 7 號(hào)染色體長(zhǎng)臂（7q34）的原癌基因，編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白 激酶，屬于 RAF 激酶家族，參與 MAPK 信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞增殖、分化及存活。其最常見(jiàn) 的突變類(lèi)型為 V600E 突變（約占 80%以上），該突變導(dǎo)致蛋白持續(xù)激活，引發(fā)細(xì)胞異常增 殖，與黑色素瘤（約 30-60%）、甲狀腺乳頭狀癌（約 40-45%）、結(jié)直腸癌（約 10-15%） 等多種惡性腫瘤密切相關(guān)。

      BRAF 突變分為三類(lèi)：I 類(lèi)（如 V600E，單體激活）、II 類(lèi)（二聚體激活）和 III 類(lèi) （失活突變），其中 I 類(lèi)對(duì) BRAF 抑制劑（如達(dá)拉非尼、維莫非尼）敏感，雙靶治療（達(dá) 拉非尼+曲美替尼）可顯著延長(zhǎng)患者生存期。BRAF 基因檢測(cè)在腫瘤診斷、靶向治療選擇、 預(yù)后評(píng)估及耐藥監(jiān)測(cè)中具有重要臨床價(jià)值，是精準(zhǔn)醫(yī)療的關(guān)鍵靶點(diǎn)之一。

      BaF3（小鼠原 B 細(xì)胞）的生長(zhǎng)和增殖需要 IL-3 的維持。通過(guò)引入各種表達(dá)激酶的基因， 能作為 BaF3 的驅(qū)動(dòng)基因，讓 BaF3 不再依賴(lài) IL-3 而增殖，進(jìn)而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴(lài)的驅(qū)動(dòng)基因，用于評(píng)估小分子藥物對(duì)激酶的靶向抑制作用，原理及流程見(jiàn)下圖所示。
 

Figure 1. BRAF[V600D] BaF3 細(xì)胞的構(gòu)建原理圖

1.WB of BRAF[V600D] BaF3

Figure 2. WB of BRAF[V600D] BaF3
 

2.Sanger of BRAF[V600D] BaF3


Figure 3. Sanger of BRAF[V600D] BaF3
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of BRAF[V600D] BaF3(C1).